黃鰭鯛和鱖魚胃蛋白酶原的分離純化與酶的性質研究.pdf

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      編號:20190316171816124    類型:共享資源    大?。?span class="font-tahoma">1.19MB    格式:PDF    上傳時間:2019-03-21
        
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      黃鰭鯛 鱖魚 胃蛋白酶 分離純化
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      本文以海水黃鰭鯛和淡水鱖魚為材料,通過硫酸銨鹽析、DEAESephacel離子交換以及SephacrylS200凝膠過濾等方法首次分別從其胃內純化得到四種胃蛋白酶原,并對該酶的相關性質進行了比較研究,為胃蛋白酶的開發利用提供實驗依據,也為這兩種極具經濟價值魚類的消化生理研究打下基礎。SDSPAGE顯示純化得到四種黃鰭鯛的胃蛋白酶原(PGI,PGⅡ,PGⅢ和PGⅣ)的分子量分別為36,32,32以及34kDa;鱖魚的四種胃蛋白酶原(PGI,PGⅡ,PGⅢ(a)及PGⅢ(b))的分子量分別約為36,35,38以及34kDa。在pH2.0下,各胃蛋白酶原能在短時間內轉化成為活性態的胃蛋白酶,它們的相對分子量均約為30kDa。以酸變性牛血紅蛋白為底物,四種黃鰭鯛胃蛋白酶的最適pH為3.03.5,最適溫度為4550℃。四種鱖魚的胃蛋白酶的最適pH為3.5,最適溫度為4045℃。八種胃蛋白酶都屬于酸性蛋白酶(天冬氨酸蛋白酶),pepstatIn是它們的有效抑制劑,但抑制效果略有不同。四種黃鰭鯛胃蛋白酶對酸變性血紅蛋白的Km值分別為:8.7×108,1.0×107,8.6×108和7.3×108mOlL,鱖魚的Km值分別為:2.3×107,1.2×107,2.4×108和1.3×107mOlL。以黃鰭鯛PGI和PGⅡ制得的一次抗體作WesternblOt顯示PGⅡ能與黃鰭鯛四種蛋白酶都能發生強烈的免疫交叉反應,而PGI除與PI能發生強烈反應以及與PⅡ有微弱反應外,與其他兩種蛋白不反應。分析鱖魚PGI和PGⅡ的N端前12個氨基酸序列,發現兩者的同源性達92%。
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